敏感的单位

大多数标仪说明书将表达其敏感性作为一种物质的数量,通常是ATP或荧光素酶发光荧光素表示荧光。对于其他检测技术来说,它可能是任何其他被使用该技术的试剂盒检测到的物质。他们还会使用Femtomole、Attomole和Zeptomole等术语。那么,这些术语是什么意思?

你知道,阿伏伽德罗常数是一摩尔物质中的分子数。它的值是6。022 × 1023。因此,一摩尔物质由60225,000,000,000,000,000,000,000个分子组成:

  • 一个Femtomole是1 × 10-15年也就是千万亿分之一摩尔(0.000000000000001)。这是~602,200,000个分子(阿伏伽德罗数X (1 X 10-15年)。
  • 一个Attomole是1 × 10-18年也就是1 / 100001mol(0.000000000000000001)等于~ 602200个分子。
  • Zeptomole是1 × 10-21年也就是1mol(0.000000000000000000001)的二分之一,等于~602个分子。

正如你从上面所看到的,这意味着我们正在处理非常小的数字,特别是在Zeptomole级别上。那么,我们如何利用这些来评估任何乐器的性能呢?我们需要考虑两个关键标准:检测下限(灵敏度)和变异系数。

  • 检测下限是产生高于空白噪声的仪器响应的最小样本量,称为灵敏度。
  • 变异系数是一组读数随时间的变化百分比-这意味着仪器性能的一致性。

变异系数和下限只能用已知的标准来计算。

计算检测下限

我们Berthold只使用已知标准和以下公式来计算检测极限:

用于检测酶标仪检测限的公式
浓度年代 标准*信号浓度为pg/mL
方差B 井的标准偏差填补空白
的意思是年代 带有标准*的井的平均值
的意思是B 平均井填空白

*任何标准点的平均读数至少超过空白的平均读数100倍。

根据上面的公式,稳定的背景变得非常重要:我们取背景均值的3个标准差,也就是正态分布的> 99%。灵敏的仪器将对空白噪声和样本信号有清晰的区分。看看下面的例子,看看高背景变化的影响:

仪器1 仪器2
的意思是B 50 15
方差B 10 15
浓度年代(pg / mL) One hundred. One hundred.
信号标准 100000年 100000年
信号/噪声 2000年 6667年
计算检出限 0.030 0.045

仪器2虽然具有较低的本底信号,但由于其较高的本底标准差,其灵敏度较低。检测下限(灵敏度)可以帮助您节省金钱和时间,如果检测信号接近检测下限是关键:一方面,它帮助您减少昂贵的试剂或有价值的细胞消耗;另一方面,您可以显著减少每个样本的读取时间,并节省宝贵的总操作时间。因此,当考察灵敏度时,仪器中使用的检测器的稳定性是极其重要的。这就是为什么我们在Berthold手选择我们的Photo Multiplier Tubes (PMT’s),并在不同的温度下测试它们的以下参数,以确保最佳的结果:

  • 噪音低,背景稳定
  • 蓝色/绿色/红色效率
  • 长期稳定性
  • 检测效率高

我们的酶标仪只使用低噪声、稳定的本底、高效率和在通常实验室温度下长期稳定的pmt。这保证了成功研究所需的性能。这使得Centro XS微板照度计和三星5多模读卡器是同类仪器中最灵敏的。