为什么在酶标仪中使用单色仪?

微型板块的读者被广泛应用于许多科学领域的方法中。一些方法,如发光,不需要任何波长选择的方法,因为所有的光子被捆绑在一起来计算样品的发光。然而,大多数方法要求能够将测量波长限制在一个狭窄的带宽内:例如,测量感兴趣物质的最大吸收值周围的吸收,只激发单个荧光团或分离不同报告蛋白的发射。

传统上,滤光片被用来选择想要的波长:它们价格实惠,易于使用,并由于其高透光率和阻隔特性而提供高灵敏度。然而,它们缺乏灵活性,因为使用不同的波长需要使用不同的滤光片,而且它们不适合测量一种物质的光谱。了解更多有关单色器的原理和类型

在酶标仪中,单色仪主要用于测定吸光度和荧光强度。

酶标仪最相关的单色仪规格

光谱范围(波长范围)

市场上许多酶标板阅读器的吸收范围从230 nm到1000 nm。有了我们的系统,您可以使用高达200纳米的单色器。当测量荧光时,许多酶标仪只能测量到700或740 nm。我们的仪器可以覆盖范围达850纳米

频谱带宽

光谱带宽(也称为光谱带通)定义为光达到最大值的一半时的宽度(半最大值的全宽度,缩写为半宽)。狭缝宽度决定光谱带宽:狭缝宽度越宽,光谱带宽越窄。市场上许多微孔板阅读器都有固定的光谱带宽。然而,我们的酶标仪配有单色仪,带宽从4nm(或6 nm,取决于设备)到22nm不等。更窄的带宽可以提高分辨率,推荐用于激发峰和发射峰非常接近的荧光。更宽的带宽可以提高信噪比。具有可变光谱带宽的单色器对于优化复杂的分析是非常有用的。

屏蔽效率

阻塞效率是波长选择系统阻止不需要的波长(除了在单色器中选择的范围)的能力,并且是实现良好的信噪比的关键。它表示为离开单色器的不需要的光的比例:阻塞效率为103意味着一千分之一的不需要的波长的光没有被阻挡并退出单色器。大多数酶标仪使用a双单色仪配置达到10的阻塞效率6,这是大多数荧光强度测定所必需的。

杂散光

杂散光是从单色器中以与所选波长不同的波长发出的被测量的光量。它是由色散元件或其他光学表面的缺陷、衍射效应、其他光学像差或损坏和磨损部件造成的辐射。

在吸收测量中,散射光会偏离朗伯-比尔定律。在高吸收值下,吸收和浓度之间的线性关系受散射光的影响很大。它引入了一种在浓度增加时降低吸收的系统性偏差。杂散光也是影响分析线性动态范围上限的主要参数,也会给荧光测量带来问题。

杂散光表示为出单色器的光的一部分:指数为104表示出单色器的光的1/10000是杂散光。

而市场上大多数酶标仪的杂光指数在3 × 10之间45 x 104,Berthold Technologies制造的仪器拥有10的优良指数6也就是说,至少要好20倍,在所有基于单色仪的测量中提供最高的可靠性。

光谱分辨率

分辨率是单色器中可设置的最小带通;一旦单色器元件及其位置固定,分辨率就由最小狭缝宽度决定。分辨率对于准确测定样品的光谱是至关重要的。在低分辨率下测量时,原本尖锐的光谱峰会变宽,如果使用较宽的狭缝宽度甚至会消失;窄缝的光谱形状更接近原始光谱。在图1中,你可以看到一个光谱扫描分辨率影响的例子:分辨率为4nm时,500 nm附近的3个峰看起来比1 nm附近的峰更平坦,但它们仍然很容易区分;然而,在15nm分辨率下,它们似乎融合成一个单峰,导致信息丢失。

在我们的酶标板阅读器中使用的单色仪的光谱分辨率为4或6 nm(取决于设备),而许多竞争对手的荧光分辨率只有9、15甚至20纳米。

图1:光谱分辨率对光谱扫描的影响

什么时候用滤光片测量,什么时候用单色仪?

这取决于具体的化验方法。对于一些测量,例如。荧光偏振,必须使用滤光片,因为单色器的偏振不容易调整。在其他情况下,如BRET,所需的灵敏度将很难用单色器实现。

一般来说,用滤光片进行的测量比用类似仪器中的单色器进行的相同测量具有更高的灵敏度。然而,在许多情况下,单色器提供的灵敏度已经足够好了,更大的灵活性和便捷性是一个受欢迎的优点。

Berthold Technologies的基于单色仪的酶标板阅读器提供了两个世界的最佳选择:您可以自由选择滤镜和单色仪,为您的分析提供了最佳性能的选择。

我们的微孔板阅读器与单色

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