细胞内钙测量的重要性

二价钙是许多真核生物信号转导途径中的细胞内信使。大多数钙信号系统都有一个共同点:它们产生短暂的钙脉冲,从而调节细胞功能。

细胞内钙的水平通常保持低,因为钙通常与磷酸化和羧化化合物形成不溶性复合物。通常,细胞溶质钙浓度为100nm。响应于刺激钙,可以从外部介质或内部储存释放以提高钙浓度。

用发光法测量细胞内钙

通过在闪光型发光反应中的Aequorin手段监测细胞内钙水平的变化是高效的。两者的测定,诱导肌醇磷脂降解的G蛋白偶联受体的激活(也称为GPCR或7TM受体)和电压门控钙离子通道的活性 - 后者导致相当缓慢的涌入 - 可以用使用试剂喷射器先涛公司光度计Tristar².或者Mithras².微孔板读者。

荧光法测定细胞内钙

而且,可以通过使用诸如Fura-2或Indo-1的多环螯合剂来监测完整细胞中游离钙的浓度。Fura-2和Indo-1提供比率读出,从而降低通过泄漏或漂白染料或改变测定条件引起的效果。

当钙结合时,两种染料的荧光性质明显改变,因此可以响应于特定信号转导途径的钙通量的直接检测。当染料用钙饱和时,来自Indo-1的发射从Indo-1的钙培养基中的〜475nm换档到〜400nm。对于Fura-2,在结合钙后,Fura-2的吸收最大从380nm到340nm偏移,而发射在510nm处保持恒定。这导致荧光强度的相反变化:340nm的增加和380nm的降低。

过滤器改变了我们的多模微型板块的读者非常快(~ 150ms),当需要监测钙浓度快速变化时,可以实现高分辨率的检测。使用至少一个位于读数位置的注射器,可以监测快速反应动力学。

荧光剂Fluo-4也可以用来监测细胞内的钙变化,它的优点是使用单一的测量,所以不需要更换过滤器。这是有益的,如果细胞内钙水平的变化太快,使用的仪器(例如,如果它使用a单色仪或有缓慢的过滤器更换)。然而,它不是比率计量的,因此它更容易变化的化验条件,泄漏和漂白。

与细胞内钙相关的应用说明

钙监测与Mithras使用Fura-2与Mithras LB 940多模板读卡器进行钙监测

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细胞内Ca2+与Clonetics™主要传感器和Orion II使用Orion II微孔板发光计监测用克拿尼™初级传感器监测细胞内Ca2 +通量

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使用CA2 +测量和Tristar²S筛选GPCR拮抗剂3个市售化合物筛选P2Y2受体抑制使用钙动员试验与两种不同的荧光染料在三星²LB 942多模酶标仪测量。

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推荐用于细胞内钙含量测量的仪器

如上所述,建议在测量位置的注射器用于使用发光的细胞内测量,而快速开关滤波器用于使用荧光的测量。所有微型板块的读者下面履行这些建议。

管亮度计配备了注射器也可以用于细胞内钙的测量使用发光,也适用于样品吞吐量低。在管式光度计中,喷射器总是处于测量位置。